De antiinflammatoriske effekten av noen proteintoksin Hydrolisates.

(Publisert i “LIFE CARE”, Nei. 6, 1989, Når. 227-281)
M.R.Simionovici, Niculina Boesteanu, Dan Florică, Carmen Gheorghiu, Marilena Teodorescu, Til. Chirita
(Kjemisk-Pharmaceutical Research Institute, Bucuresti), A.G.Savulescu (Hospital Baloteşti, Ilfov)


 
Oppsummering.

Den anti-inflammatoriske virkning av enkelte proteintoksin hydrolisates (PL) ble testet på de eksperimentelle modeller av betennelse med Carrageen på rotter og Freud Adjuvans Leddgikt på rotter og på guineea griser. PL-s er: PL1 (hesteserum hydrolysat), PL2.1 og PL2.2 (Casein hydrolisate). Den hydrolisate har som aktivt middel en bestemt mengde og kvalitet av polypeptider med liten molekylvekt unngås av antigenisitet, unngås for pyrogene stoffer, og med en meget liten toksisitet. Alle tre PL-s testet hadde anti-inflammatorisk virkning. PL1 og PL2.1 hadde en ekstremt gunstig terapeutisk verdi.

Disse resultatene kan åpne et nytt terapeutisk måte i inflammatoriske syndromer, spesielt i reumatiske sykdommer.

Stikkord: Polypeptider, Anti-inflammatorisk effekt.

Innledning.

Hensikten med dette papir, er å kontrollere den anti-inflammatoriske virkning av enkelte proteintoksin hydrolisates (PL) som vi hadde foreløpige eksperimentelle og kliniske studier (2,3,4,5,6,7,8,11,13,15). De hydrolisates vi testet ble hentet fra hesteserum den PL1 (Cantacuzino Institute – Bucuresti), fra ren Fluka Casein PL2.1 og fra industri Casein PL2.2 (ICCF- Bucuresti). Vi brukte test av betennelser med Carrageen og Freunds Adjuvant Arthritis på Wistar-rotter og griser guineea.

Materiale og metode. PL-s ble oppnådd ved sur hydrolyse. Her er ufravikelige kjemiske konstanter for hver PL. De unngås ot antigenisitet og pyrogenic stoffer også. De har ingen proteiner (testet med tre klor eddiksyre, sulphosalicilic syre, Perklorsyre reaksjonene) men de har polypepeptides med liten molekylvekt (fosforwolfram reaktiv i surt medium). Aminic nitrogeninnhold (Moore og Stein metoder), nitrogeninnhold (Lowry og Biuret metoder), molekylvekt i Sefadex G75 filtrering sammenlignet med rene peptider kurver) ble etablert (1,10).

For betennelse med Carrageen ble de tatt tre grupper på ti Wistar hannrotter, 200-+10g vekt, som ble administrert 0.1 ml. Carrageen 1% i labben. PL-s ble administrert peritoneal 5-ml/Kg-weight dyr tretti minutter før flogistisk agenten ble administrert. For dobbel sammenligning bruker vi saltvann. De ble gjort plethysmometrical bestemmelse av volumet av den bakre pote (injisert) ved første øyeblikk, starten av eksperimentet, på 2,4, og 24 timer fra Carrageen inokulasjon. Dosene av PL-s, viste intables, ble uttrykt i milligram mdrying Residium uten NaCl. Dette er den aktive substans. Resultatene ble uttrykt av Newbould formule (9), som vurderer den reduserende av betennelse i forhold til den innledende verdien oppnådd ved vitne dyrene.

For Complete Freund Adjuvant betennelse ble det tatt en rekke seks Wistar mare rotter for hver gruppe. De ble injisert på grunnlag av fortellingen med Komplett- Bacto Adjuvant Difco (inaktivert Mycobacterium butiricum i Freund Adjuvant) 0.1 ml i den første og den 28-th døgn, til den første og andre gruppe av dyr. PL2.1 ble administrert intraperitoneum, mg / Kg. dyr (aktivt stoff), bare på den første gruppen, hver dag fra den første dagen 43 dager lange. Den tredje gruppen var av vitne, normale dyr.

Eksperimentet varte 565 dager. Den ble etterfulgt vekten kurve, den pletismometrical måling av den høyre bakre pote og ved 54-th dager Anatomico – patologiske skader.

For forsøket med guineea griser tar vi fem dyr, 350-+50g.weight, for hver gruppe. Den første og den andre gruppen ble injisert med 0.5 ml. Freund Adjuvant i bakre pote, den første og den syvende dager (14). Den tredje gruppen var med normale dyr vitne. Eksperimentet varte 14 dager. På slutten av rettssaken ble gjort Anatomico – patologiske observasjoner.

Resultater.
De anti-inflammatorisk virkning av PL-s på Carrageen eksperiment.
Anti-inflammatorisk handling av PL-s på Carrageen rettssaken. Prosent effekter på å redusere betennelse.

Bord 1
Mg / kg 2H 4H 24H
PL1 5 8 12 43
PL2.1 1 36 50 34
PL2.2 1 19 24 4
Saline 5 ml. 0 0 0

Bord 2
Anti-inflammatorisk handling av PL2.1 på Carrageen rettssaken. Prosent effekten av å redusere betennelsen.
Doser mg / kg 2H 24H
0.1 27 22

1.0 36 34
3.5 71 55
35.5 92 13

Fra Table 1 vi kan observere at tre PL har anti-inflammatorisk effekt i ulike grader. Den effektive doser i aktive stoffer er svært lav, og effekten er fortsatt god 24 timer fra Carrageean administrasjon. Resultatene presenteres i tabell 2 viser avhengigheten av den anti-inflammatoriske virkning av PL2.1 på dosene og tillater å beregne den effektive dose 50% (ED50) ved den grafiske metode av probit. Den ED50 på to timer er 1.8 mg / Kg. på 24 timer. Fra den første tabellen kan vi se også at PL2.2 som er en proteintoksin hydrolisate, fremstilles fra det industrielle Casein, har en anti-inflammatorisk virkning, men en lav en (sammenlignet med PL1 og med PL2.1), samt kan man se, selv i tabell 1 at den anti-inflammatoriske effekten av små doser av polypeptidlignende løsningen (alle de tre PL-s) mot null effekt av saltoppløsning. For PL2.1 har det blitt bestemt at akutt giftighet ved intraperitoneum administrasjon på mus. Det viste en dødelig dose for 50 prosent (LD50) av 576 mg / Kg. kroppen. I et slikt tilfelle den terapeutiske verdi (LD50/ED50) er ekstremt gunstig.

Fra Table 3 vi kan følge noen eksperimentelle resultater av rettssaken med Freund Adjuvant betennelse på rotter.

Bord 3
Verdien (mener på 10 dyr) av av wright posterior labben, i kubikk millimeter.
Grupper Day of eksperiment innledende 8 10
15 20 30 56 økende %
PL2.1 + Fr.Adj.
39 38 38 38 39 42 42 +7
Fr.Adj. 35 40 40 40 40 41 43 +23
Vitne 38 38 38 38 39 39 40 +5
Utviklingen av vektkurve (betyr på 10 dyr).
Day of eksperiment Grupper
innledende 8 15 20 27 56 øke %
PL2.1
Fr.Adj. 150 142 145 160 156 185 +23
Fr.Adj. 159 148 155 156 159 177 +11
Vitne 152 160 165 168 170 180 +18

Vi kan vite at den anatomiske- patologiske skader med den eksperimentelle artritt med Freunds Adjuvant på rotter som den eksperimentelle miositis på guineea griser med Freunds Adjuvans viste dystrofe endring, nekrose, limphocitis infiltrasjon i: leveren, milt, nyre, lungene, skade av brusk og capsula av leddet. Alle skadene var mindre viktig på dyrene beskyttet av PL-s.

Konklusjoner.
Den experime nt som har vært gjenstand for dette papir viser at en bestemt kvalitet på polypepotides med en liten molekylvekt, realisert ved proteic hydrolisis av hesten serum eller Casein, har anti-inflammatorisk virkning. Denne egenskapen er til stede på et svært lite doser. Det er mulig å ha i vis en cellulær inngrep ved å forbedre den enzymatiske skade direkte, av kjemiske mediatorer eller indirekte av thermodinamic nivå.

Den lille molekylvekt som polypeptider og deres termisk stabilitet (på 120 Celsius grad) sørge for at parenteral administrasjon (i injeksjon). Fraværet av antigenisitet og ingen pyrogene stoffer er en annen fordel.

Vi tenker at dette resultatet kan åpne en interesse i at nye terapeutiske veien for reumatiske sykdommer og andre inflammatoriske klager.

Referanser.
1. Andrews P. Metoder for biokjemisk analyse, Glik D. Interscience publ., 1970, vol.18
2. Bird J. (CoLab) Anti-inflammatorisk funksjon av Protein, Brit. J. Farmakologisk, 1979, 66, 455.
3. D'tri G. (med) Aktiviteter av Lysartrosi eller polypeptid av serotonin på inflamatione, Mine.
Med., 1971, 62,3–4, 71.
4. G D'Atri (med) Aktiviteter av Lysartrosi. På. Med., 1971, 62, 3-4, 89
5. Gomarasca P. (med) Aktiviteter Antibradichininica av Lysartrosi, På. Med., 1971, 3-4, 89
6. Gomarasca P. (med) Interatione tra Lysartrosi, På. Med, 1971, 3-4, 142
7. Holl jeg. (med) Anti-inflammatorisk Activitie av Aminocyanoborane og Aminocarboxiborane og relaterte forbindelser, Sch. Pharm. Sci. 1980, 60, 9, 1025.
8. Nagal K. (med) Anti-inflammatorisk handling av L- Carnosine, Artz. Forch., 1970, 20, 1876.
9. Newbould B.B. Brit. J. Pharmacol., 1963, 21, 127.
10. Moore S. (med) J. Bio. Chm., 1954, 211, 893.
11. Savulescu Alex. Muskuløs revmatisme, behandling av desensitivisering regionale, Rev.de Bevissthet, 1935, 1, 23.
12. Sãvulescu A.G. (med) En spesifikk behandling av revmatisk leddgikt og Ankilosante Sopondylite av en original metode, Acta Rheuma. Port. 1977, 5, 9,16.
13. Sãvulescu A.G. (med) Leddgikt Behandling av proteintoksin Lysates, Acta Rheuma. Port., 1979, 7,1, 31.
14. Sima Jeg. (med) Eksperimentell Myositt Polymyositt marsvin Modell for Menneskelig, CMR Scientific Session., 1981, Bucuresti.

Copyright © Geo Savulescu 2003